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液相色谱（LC）
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主题：【讨论】HPLC 方法摸索

浏览0 回复20 电梯直达
hupilan007
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发表于：2009/04/29 10:16:01 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
HPLC_1200_B: 14-Apr-2009 461336 AND 461337
大家都知道HPLC方法说简单也简单，说难也难。就我所知的也不多,无外
色谱柱的选择，流动相的选择以及样品前处理方法的不同.柱子我一般用C18，C8 的，耐酸的一般 Agilent zorbax SB C18,而其余的只要满足PH 2-8就可以了。超出范围就不是柱子问题了，该考虑流动相换缓冲液了。其实我真的不知道各种不同型号的柱子有什么不同。粒 径 小的当然柱效高，分离效果好些，但是压力往往高，对色谱柱要求也比较高，也就是费柱子,而粒径大的自然分离效果差了。象是键合相，什么十八烷基，氨基等，用是用过，但也搞不懂有什么太大差异。反正HPLC方法色谱柱的选择我是知道的不多。
推荐答案：村长回复于2009/05/07
建立一个方法首先得知道你的药分析物质的理化性质，例如pKa值，极性大小，是否容易分解，溶解性，在紫外有无吸收等等。然后再研究用什么方法，正相还是反相，流动相pH，加不加离子对或者缓冲盐......啊呀，需要考虑的太多了，具体问题具体分析，给你一本书，研究去吧
实用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱法的建立[/url]
实用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱法的建立[/url]
补充答案：

fengxuemei回复于2009/05/07

还有本书： 实用高效液相色谱法的建立(第2版)
很经典的，资料中心有下载的，建议LZ好好看看，找不到也可以站内短信联系我~~~

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hupilan007
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2009/4/29 10:17:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相无外乙腈，甲醇与水配了，大多数物质都可以用它们分析了，如果有解离再换缓冲液，或者加甲酸，三氟乙酸什么的 流动相的选择在我看来就是这么简单而已。样品前处理相对可能就复杂一些了。有盐析，醇析，过滤，离心等等，搞不好就会影响方法的可靠性，准确性。反正摸方法真的我是外行，不知怎么搞，向各位高手求助，希望大家不吝赐教！
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zxc198502
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2009/4/29 10:36:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看着挺乱的
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老多_小多
emoc98311
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2009/4/29 10:55:09 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
确实是，条理再写好点
都看不出你设悬赏的意图
HPLC 方法摸索说的太笼统
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知足常乐！
wenshaowei-2008
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2009/4/29 11:06:59 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在开发HPLC分析方法之前，首先要对被测物的一些性质进行了解
液相方法无非就几点：1.检测器，可以利用物质的结构，确定选择什么样的检测器，如选择紫外，就可以用紫外分光光度计扫描最大波长
2.柱子的选择，一般首选C18柱，特殊物质可以选用专用的柱子，如手性柱
3.流动相，正如LZ所说，一般物质都可以用水和乙腈或者甲醇就可以了，但是有的时候分离效果不佳，可以选择用缓冲盐，调PH值，真假柱温等
4.物质的浓度，可以根据仪器的灵敏度，选择合适的浓度
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hupilan007
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2009/4/29 11:46:11 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家能否再说得详尽些呢。
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老多_小多
emoc98311
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2009/4/29 12:00:08 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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hupilan007
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2009/4/29 13:15:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
的确，我电脑输不了中文，全靠复制粘贴了，没办法啊！
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abalone
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2009/4/29 14:04:22 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果不是新药，很多方法可以查找文献参考
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楚无伤
lyg1281
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2009/4/29 16:14:51 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主定义不明确呀
如果单单只算HPLC上面的方法
也不是这么简单的

检测器的种类——紫外、视差、电化学等等？
柱子的种类——C18、氨基柱、酶柱等等？
流动相的种类——甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷等等？
流动相的组成——梯度、比例？


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〓猪哥哥〓
03yx2
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2009/4/29 20:32:33 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
HPLC方法摸索不是很难，关键在于你在摸索的时候会碰到怎么摸索条件都不合适的时候，这时候才会有问题。其他的也都比较普遍。还应具体问题具体分析。
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