最近我们实验室的HPLC液相坏了,关键问题有两个,第一个是检测器的响应值不高,第二个问题是在走梯度的时候,色谱柱压很不稳。然而用一个泵走等度的时候,柱压还OK,当用两个泵走等度时,柱压就很不稳,更不用说走梯度了,根本没法使用,柱压不稳,基线也不平。在排除了柱子与流动相的问题以后,初步估计是液相的二元泵出了问题。在向老师反应问题后,根据老师的指点,我对泵进行了一个排查,下面简述一下我的排查过程:
首先介绍下出问题的仪器HPLC-ELSD
1)ELSD检测器响应值不高,初步估计是检测器脏了,若要进行检测器彻底的清洗,需要专业的工程师,我们采用的方法是将检测器漂移管温度设为100℃,用色谱纯甲醇进行冲洗24h-48h,在进行两天两夜的冲洗以后,响应值确实有所提高。
2)下面关键是对泵的问题的排查。
在使用硅胶柱,正己烷做流动相,仅开B泵,流速1ml/min时,色谱柱柱压为756且柱压稳定。然而当仅开A泵,流速1ml/min时,色谱柱柱压为424,且柱压不稳定(所用的流动相都是正己烷)。刚开始以为是B泵堵了,因此柱压较高。将B泵的滤头,以及泵内的四个单向阀都拆下来进行清洗(用10%的色谱纯甲醇,超声30min)。超声结束后装上单向阀(注意:单向阀上有箭头标志,在安装时,箭头要始终朝上)。在经过清洗以后,结果发现还是老样子,这就纳闷了是怎么回事呢?难道是A泵出了问题?
3)检查A泵
对A泵进行检查,发现A泵的流速达不到1ml/min,此外,柱压很不稳定,与B泵比明显偏小,初步估测可能是A泵的单向阀出了问题。但A泵有四个单向阀,如果将四个单向阀都进行更换,成本还是相当高的,但若可以确定哪个单向阀出现问题,进行有针对性的更换,那就可以大大减少成本了。
当然,你把四个单向阀按照顺序逐个拆下来,进行排查,最终是可以判定到底是哪个单向阀出问题的,但是这样比较耗时,若运气好,第一个就是坏的,你刚换上就OK了,那大工就告成了。但若运气不好,换到第四个才发现问题,那还是蛮悲剧的。现在我向大家介绍一个小技巧,可以使效率提高一倍。在泵运行时,在图中白色的点出来的时候用手按住(见五角星处),同时眼睛关注柱压,若在手按住的同时柱压升高,那基本可以判定这两个单向阀没问题,若柱压降低,那很有可能问题就是出在这两个单向阀里面啦,我就是用这种方式排查的,结果是A泵左上的那个单向阀出的问题,更换以后就好了。
4)在更换好坏了的单向阀以后,用正己烷作为流动相,分别开两个泵,柱压可以保持稳定,且A泵的流速也正常了是1ml/min,走等度与走梯度都没有问题了。折腾了一天就折腾好了,现在我们实验室的HPLC运行的还是很不错的。以上是我总结的小小的关于HPLC清洗维修的一点小经验,初来乍到,还不是很懂,若有说的不对的地方,希望大家多多指正,至于为什么用手按住,柱压降低就表示问题出在这两个单向阀内,原理我不是很清楚,若有知道的同学可以解释下啊,呵呵~~~