主题：【第十七届原创】液相色谱测乳尿素氮

液相色谱检测牛奶中的尿素的操作要点
一、样品前处理

取适量牛奶样品，一般为 5 至 10 毫升，置于离心管中。

加入一定量的沉淀剂，如乙腈、甲醇等，目的是去除牛奶中的蛋白质等干扰物质。例如，可以加入与牛奶等体积的乙腈，充分振荡混合后，静置一段时间，使蛋白质沉淀。

对混合液进行离心处理，通常以较高转速（如 8000 转 / 分钟以上）离心数分钟，使沉淀与上清液分离。

取上清液，通过过滤膜（如 0.22 微米的滤膜）进行过滤，去除可能残留的微小颗粒，得到待测样品溶液。

二、色谱条件设置

色谱柱选择：

选用适合分离极性物质的反相色谱柱，如 C18 柱。可以根据实际情况选择不同长度和内径的色谱柱，以满足分离要求和仪器兼容性。

考虑柱子的粒径，较小粒径的色谱柱通常具有更高的分离效率，但也可能带来较高的柱压。

流动相：

常用的流动相组合为甲醇 - 水或乙腈 - 水体系。可以通过调整两者的比例来优化分离效果。

为了改善峰形和分离度，可以在流动相中添加适量的缓冲盐，如磷酸盐缓冲液等。但要注意缓冲盐的浓度不宜过高，以免对色谱柱和仪器造成损害。

流动相在使用前需进行脱气处理，以防止气泡进入色谱系统影响检测结果。可以采用超声脱气或在线脱气等方法。

流速：

一般设置在 0.8 至 1.2 毫升 / 分钟之间。流速的选择要综合考虑色谱柱的规格、分离效果和分析时间等因素。

柱温：

通常设定在 30 至 40℃之间。适当的柱温可以提高分离效率，减少峰展宽，同时也有助于保持流动相的稳定性。

检测波长：

尿素在特定波长下有较强的吸收，一般选择在 195 至 205 纳米左右的波长进行检测。

三、仪器操作

开启液相色谱仪，按照仪器操作规程进行预热和稳定。

设置好色谱条件后，进行空白运行，确保系统无杂质干扰。

注入标准品溶液，建立标准曲线。可以使用不同浓度的尿素标准溶液进行多次进样，绘制浓度与峰面积的标准曲线。

注入待测样品溶液，记录色谱图。根据保留时间确定尿素的出峰位置，并通过与标准曲线对比计算出样品中尿素的含量。

四、结果分析与质量控制

对检测结果进行分析，判断样品中尿素的含量是否符合相关标准。

进行质量控制，包括定期校准仪器、检查色谱柱性能、进行空白试验和加标回收试验等。

空白试验：检测不含尿素的空白样品，确保系统无背景干扰。

加标回收试验：在已知不含尿素的牛奶样品中加入一定量的尿素标准品，按照样品前处理和检测步骤进行操作，计算回收率。回收率应在合理范围内，一般要求在 80% 至 120% 之间，以验证检测方法的准确性和可靠性。