主题：【分享】【金秋计划】猪苓汤中的低聚糖的体内表征、提取、分离和活性评价

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发表于：2024/09/10 14:17:16 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

低聚糖（OS）被定义为由2到10个单糖残基组成的分子，由于其多种生物活性，被广泛用于食品和制药行业。现代药理学研究表明OSs具有抗炎，免疫调节，抗肿瘤，抗氧化等作用，是中药（TCM）的主要有效成分之一。猪苓汤（Zhu-Ling decoction，ZLD）是一种经典TCM方剂，由五种药材组成，在现代临床实践中用于治疗慢性肾脏疾病。然而，ZLD中吸收（即入血）的低聚糖（OSs）的结构和活性尚不清楚。

2024年6月22日，暨南大学药学院中药与天然药物研究所戴毅团队在Carbohydrate Polymers（IF=10.7）发表题为“A novel strategy with in vivo characterization, extraction, isolation and activity evaluation for discovery of absorbed anti-inflammatory oligosaccharides from Zhu-Ling decoction”的文章，建立了一种具有体内表征、提取、分离、活性评估等功能的新策略，用于鉴定猪苓汤中吸收的抗炎低聚糖。

首先，采用UPLC/Q-TOF-MS和PMP衍生化技术对ZLD的还原性和非还原性OSs进行体外和体内还原表征。其次，通过HPLC-ELSD分析、单糖组成、MS光谱和1D/2D-NMR光谱分离并阐明了吸收OSs的详细结构。最后，利用LPS诱导的HK-2细胞炎症模型评估吸收的OS单体的抗炎特性。本研究为发现富含OS的中药方剂体内药理物质提供了新的研究视角。

1、发现可吸收的抗炎低聚糖（OSs）的新策略

如图1所示，这种建立了一种新的整合策略，包括体内表征、提取、分离和活性评估ZLD中吸收性生物活性OS。该策略采用PMP衍生化UPLC/Q-TOF-MS, HPLC-HILIC-UVD-ELSD, SPHPLC-HILIC-RID, MS谱和1D/2D-NMR谱

2、ZLD中OS的体外和体内初步表征

用PMP衍生化的UPLC/Q-TOF-MS在体内和体外进行分析显示，共鉴定30个Oss（22个还原Oss，8个非还原OSs）和11个吸收OSs （7个还原Oss，4个非还原OSs）。口服ZLD后血浆中11种外源Oss被鉴定

3、非还原性和还原性OS的分离纯化

ZLD中非还原性OS和还原性OS的提取分离流程图。

4、结构表征

ZLD中共获得11份OS，通过HPLC-ELSD分析、单糖组成分析、质谱分析、1D和2D NMR谱分析确定了还原OSs的结构。ZLD中吸收OS的详细结构信息

5、吸收的OSs对LPS诱导的HK-2细胞炎症因子TNF-α和IL-6的影响

研究选择LPS诱导的HK-2细胞炎症模型，通过检测IL-6和TNF-α的分泌水平来检测吸收OSs的抗炎活性。此外，由于蔗糖是食品中常用的原料和辅料，本研究仅对10种吸收的OSs进行了抗炎活性评估。ZLD, laminaritriose, laminaritetraose 和laminaripentaose显著抑制TNF-α水平（图9）。ZLD, laminaritriose, laminaritetraose, laminaripentaose和laminarihexaose显著抑制IL-6水平（图10）。

6、laminaritriose，laminaritetraose， laminaripentaose对NF-κB和Akt/mTOR信号通路激活的影响

在LPS诱导的细胞炎症模型中，炎症细胞因子和趋化因子的过量产生与NF-κB信号通路的激活有关。作者通过检测了NF-κB信号通路关键蛋白磷酸化，研究laminaritriose，laminaritetraose，laminaripentaose对NF-κB信号通路的调控作用（图11），还利用相关通路激活剂和抑制剂调节LPS诱导的HK-2细胞的NF-κВ和Akt/mTOR信号通路（图12、13）。结果表明，laminaritriose，laminaritetraose，laminaripentaose可以通过抑制NF-κB和Akt/mTOR的激活，降低炎症因子和趋化因子的表达。

总结

采用UPLC/Q-TOF-MS和PMP衍生化方法，在体外和体内分别发现30个OSs和11个Oss，并进行了表征。其中，采用HPLC-HILIC-UVD-ELSD、SPHPLC-HILIC-RID、单糖组成、MS和1D/2D-NMR光谱分离鉴定了一系列?1→3-β-D-Glcp-OSs ，包括 laminaritriose, laminaritetraose, laminaripentaose, laminarihexaose, laminariheptaose, laminarioctaose和laminarinonaose.。此外，通过与参考标准品的比较，鉴定了4种非还原性吸收OSs，包括sucrose, trehalose, raffinose 和stachyose。其中，laminaritriose, laminaritetraose and laminaripentaose显著抑制LPS诱导的HK-2细胞中TNF-α和IL-6水平，并通过NF-κB和Akt/mTOR信号通路发挥显著的抗炎作用。总之，研究作为发现吸收的抗炎OSs提供了一种新的策略，并为发现中药方剂中体内药效学物质开辟了新的视野。

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