摘要：目的建立茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱：Kromasil C₁₈柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸（10：90）；流速1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：238nm、325nm。结果：对茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸进行含量测定。栀子苷在10.43～52.15μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。平均加样回收率为97.21% RSD为1.62% （n=6）绿原酸在10.74～53.70μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=29447356x-25436(r=0.9999)。平均加样回收率为96.61% RSD为1.35% （n=6）结论该方法操作简便，结果可靠，可用于茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定。
清茵栀黄颗粒，清热解毒，利湿退黄。有退黄疸和降低谷丙转氨酶的作用。用于湿热毒邪内蕴所致急性、慢性肝炎和重症肝炎（I型）。也可用于其他型重症肝炎的综合治疗。由陈提取物、栀子提取物、黄芩苷、金银花提取物组成。为了进一步控制药品质量，我们对其中的进行了栀子苷和绿原酸含量测定，以期为后续进一步研究奠定基础！
关键词：HPLC；DAD；茵栀黄颗粒；栀子苷；绿原酸
1 仪器与试药
1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）)，必能信超声波清洗器(必能信超声有限公司)
1.2 试药
绿原酸对照品（批号110753-201314）、栀子苷对照品（批号：110749-201115），均购自中国食品药品检定研究院；乙腈(色谱纯)；其它试剂均为国产分析纯，蒸馏水自制。
2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与图谱
色谱柱: Kromasil C₁₈柱（4.6mmx250mm，5um）；
检测波长：238nm；325nm
流速：1.0ml.min^-1；
流动相：乙腈-0.1%甲酸（10：90）；
柱温：35℃。

2.2 溶液制备
2.2.1对照品溶液

取栀子苷和绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 分别含0.1043mg和0.1074mg 的混合溶液，即得。
2.2.2供试品溶液

取本品，研细，取约0.5g，精密称定置50ml量瓶中，精密加入甲醇40ml,称定重量，超声处理30min ,再称定重量，用甲醇补足减失的重量，定容至50ml,摇匀，滤过，即得。
2.3 线性关系考察
精密量取各对照品溶液，制得5个系列不同浓度的对照品溶液，各取10微升依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积Y为纵坐标，浓度X(mg·mL )为横坐标，绘制标准曲线，结果栀子苷在10.43～52.15μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。绿原酸在10.74～53.70μg范围内呈线性关系（r=0.9999 ,n=6），线性方程为y=58134683.4x-7988.3(r=0.9999)

2.4精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，计算栀子苷和绿原酸对照品峰面积的RSD分别为0.4％和1．4％。
2.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，16，24 h测定，结果表明：栀子苷和绿原酸对照品在24 h内稳定，RSD分别为1．1％和1.5％。
2.6 重复性实验
取同一批次的茵栀黄颗粒平行6份，制成供试品溶液，在上述色谱条件下分别进行HPLC分析，计算栀子苷和绿原酸对照品峰面积的RSD分别为1.2％和1.4％。

2.7 回收试验

取同一批茵栀黄颗粒，约取0.25g，共计6份，精密称定，按上述色谱条件进样测定，用回归方程计算回收率。
2.8 样品含量测定

取3个批号的茵栀黄颗粒，配制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，栀子苷和绿原酸对照品的含量，结果见表。

样品编号	栀子苷（mg/g)
20150729	2.54
20141003	2.61
20150216	2.65

样品编号	绿原酸（mg/g)
20150729	1.04
20141003	1.16
20150216	1.12

图1 茵栀黄颗粒的HPLC图谱（238nm)

图2 栀子苷的HPLC图谱（238nm)

图3 茵栀黄颗粒的HPLC图谱（325nm)

图4 绿原酸的HPLC图谱（325nm)

3.结果与讨论

（1）二极管阵列检测器即光电二级阵列管检测器又称光电二极管列阵检测器或光电二极管矩阵检测器，（Diode array detector，DAD）是20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器。在晶体硅上紧密排列一系列光电二极管，每一个二极管相当于一个单色器的出口狭缝，二极管越多分辨率越高，一般是一个二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽的单色光。光电二极管阵列检测器目前已在高效液相色谱分析中大量使用，一般认为是液相色谱最有发展、最好的检测器。本实验中，通过提取不同的波长，在同一种条件下分别测定了栀子苷和绿原酸的含量。

（2）本实验中，绿原酸最大吸收波长在325nm，栀子苷最大吸收波长在238nm，我们分别取两处波长分别测定绿原酸和栀子苷。

（3）我们分别采用了甲醇-水乙腈-水乙腈-甲酸水系统进行梯度洗脱，发现，乙腈-甲酸水水系统基线较为平整，且完全达到基线分离。

（4）本文所建立的HPLC法能测定茵栀黄颗粒中的栀子苷和绿原酸含量，方法简单，快速。

（5）本文对三批样品进行了含量测定，为栀黄颗粒中的进一步研究及质量控制提供科学依据。