藤青泡腾片提取工艺研究

藤青泡腾片是以闽产药食资源为基础制成的复方制剂，处方由藤茶、青果、葛花、甘草4味药材组成，具有调节血脂，保护化学性肝损伤的作用。传统中药煎煮繁琐，携带不便，气味较苦，将其制成泡腾片，携带、服用方便，崩解速度快，提高其生物利用度、临床疗效。

本处方中各味药的主要有效成份为黄酮，水溶性较好，且二氢杨梅素等在热水中的溶解度大，因此采用水为提取溶液进行加热提取，成本低、实验条件简单。采用正交试验的方法考察各因素对总黄酮、浸膏得率的影响，获得最佳提取工艺。

1.1仪器与试药

（1）实验仪器

电子分析天平XS105	METTLER TOLEDO
电子调温电热套98-1-B型	天津市泰斯特仪器有限公司
电热恒温水浴锅HWS24	上海一恒科学仪器有限公司
常压恒温干燥箱XMTD-822	上海精宏实验设备有限公司
紫外分光光度计UV9100	北京瑞利分析仪器公司
移液枪（200 μL、1000 μL）	GILSON

（2）实验试药

葛花产地：安徽北京三和药业有限公司

藤茶（产地：广西）、青果（产地：广东）、甘草（产地：甘肃）

芦丁对照品	批号：100080-20708 中国食品药品检定研究院
甲醇 (AR)	国药集团化学试剂有限公司
亚硝酸钠(AR)	上海联试化工试剂有限公司
硝酸铝(AR)	上海展云化工有限公司
氢氧化钠(AR)	上海联试化工试剂有限公司

1.2 泡腾片提取工艺条件的研究

1.2.1正交试验筛选

称取藤茶、葛花、青果、甘草各0.5倍处方量为1份，共9份，以加水量（A），提取时间（B），提取次数（C）为考察因素，按表1的因素水平进行L9(34)正交试验，根据总黄酮含量、浸膏得率进行评价，考察最佳提取工艺条件。

1.2.1.1水提取液浸膏得率的测定

吸取1.2.1项下提取的每份药液15 ml，转移到干燥蒸发皿内，置于水浴锅内蒸发水份至流浸膏后，放入烘箱于100℃烘干到恒重，称重，记录结果并计算，结果见表2

1.2.1.2水提取液总黄酮的含量测定

对照品溶液的制备：称芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释至每1 ml含0.2 mg的芦丁溶液，制得对照品溶液。

供试品溶液的制备：取上述9份提取物各1 ml，于50 ml容量瓶中，并用水稀释至刻度。

芦丁对照品标准曲线制备：精密吸取芦丁对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分别置25 ml（V3）量瓶中，加水至6 ml，加入1 ml的5% NaNO2，混匀，放置6min，往容量瓶里加入1 ml的10%Al(NO3)3，混匀后静置6min，加入10 ml NaOH试液，混匀，加蒸馏水至刻度，混匀，静置15分钟，以0.0 ml对照品溶液制备的溶剂为空白对照，在510nm波长下测定各组的吸光度值。以吸光度为纵坐标(A)，浓度为横坐标（mg/ml），绘制标准曲线，结果见图1。

样品测定：吸取待测溶液10 ml（V2）于25 ml容量瓶中，照芦丁对照品标准曲线制备自“加入1 ml的5% NaNO2”起，在波长510nm下测定样品的吸光度，

（X）。

根据标准曲线求出样品中总黄酮的含量

结果计算：

X—试样中总黄酮百分含量，以芦丁(C27H30O16)计， g/100g（ml）；

C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度，mg/ml；

V1—试样定容体积，ml；

V2—吸取供试液体积，ml；

V3—显色定容体积，ml；

M—试样取样量，g(ml)。

结果见表2，表3.

表1 提取正交试验因素水平表

水平	因素
水平	A加水量(倍)	B提取时间(h)	C提取次数
1	10	0.5	1
2	15	1.0	2
3	20	1.5	3

注：以D因素为误差项

图1芦丁标准品标准曲线

采用加权平均法对浸膏得率、总黄酮含量进行综合评估，由于含量对泡腾片疗效的影响较大，因此，分别给予浸膏得率、总黄酮含量40%、60%的权重进行分配。浸膏的率越高，患者最终单次的给药量越多，较低较好，以最低得率19.808%为最高得分，而总黄酮为主要有效成份，宜越高越好，故以1.969为最高得分。以序号1为例计算综合评分：(19.808/19.808)*0.4+(0.796/1.969)*0.6=0.643，同理，可求得其余各综合评分，结果见表2.

表2提取正交试验结果（n=9）

序号	A	B	C	D	浸膏得率(%)	总黄酮含量(g)	综合评分
1	1	1	1	1	19.808	0.796	0.643
2	1	2	2	2	29.159	1.109	0.610
3	1	3	3	3	34.835	1.499	0.684
4	2	1	2	3	33.656	1.490	0.689
5	2	2	3	1	37.467	1.854	0.776
6	2	3	1	2	23.851	0.978	0.630
7	3	1	3	2	40.161	1.969	0.797
8	3	2	1	3	26.402	1.099	0.635
9	3	3	2	1	34.196	1.544	0.702
K1	1.94	2.13	1.91	2.12
K2	2.10	2.02	2.00	2.04
K3	2.13	2.02	2.26	2.01
R	0.07	0.04	0.12	0.04

表3提取正交试验方差分析

方差来源	离差平方和	自由度	F值	均方	显著性
加水量	0.007349	2	3.2139	0.003675
提取时间	0.002731	2	1.1945	0.001366
提取次数	0.02189	2	9.5733	0.01095	**
误差	0.002287	2	1.0000	0.001143

由表3可知，根据水提取液中总黄酮含量与浸膏得率进行评估，各因素对结果的影响大小：提取次数>加水量>提取时间，即主要影响因素是提取次数，其次是加水量，提取时间影响最小。以实验结果为参考，结合实际生产情况，最终确定提取工艺为：加水20倍量，每次提取0.5h，提取3次。

1.2.2提取正交验证实验

根据以上所选最佳提取工艺条件，加水20倍量，每次提取0.5h，提取3次，平行3份，对水提取液的浸膏得率与总黄酮含量进行测定，按1.2.1.2项下的方法计算综合评分后，求平均得分，结果见表4.

表4提取正交实验验证结果（n=3）

编号	浸膏得率(%)	总黄酮含量(g)	综合评分	平均得分
1	37.3	2.036	0.833	0.830
2	38.1	2.038	0.829
3	37.4	2.021	0.828

由表4可知，3份平行实验最终的平均得分为0.830，接近于正交设计中的A3B1C3综合评分，且评分最高，有良好的重复性和较高的准确率，所筛选的提取工艺条件基本稳定，可作为藤青泡腾片的提取方法。

小结与讨论

在提取工艺的探讨过程中，用正交试验的方法研究加水量、提取时间、提取次数对药液浸膏得率和总黄酮含量的影响，获得最适提取条件为：20倍量水，提取3次，每次提取0.5h。试验中发现，青果为橄榄的干燥果实，本处方中用量较少，为方便称取，同时提高没食子酸等有效成份的提取率，宜先将其进行粉碎；藤茶、葛花密度小，提取过程中浮于水面，应将其充分润湿，使其浸没于水中，以免影响各成份的提取率；若直接加热煎煮，提取过程中水分蒸发严重，实验结果重现性差，宜采用冷凝回流的方法进行提取。