维权声明:本文为nphfm2009原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
藤青泡腾片提取工艺研究藤青泡腾片是以闽产药食资源为基础制成的复方制剂,处方由藤茶、青果、葛花、甘草
4味药材组成,具有调节血脂,保护化学性肝损伤的作用。传统中药煎煮繁琐,携带不便,气味较苦,将其制成泡腾片,携带、服用方便,崩解速度快,提高其生物利用度、临床疗效。
本处方中各味药的主要有效成份为黄酮,水溶性较好,且二氢杨梅素等在热水中的溶解度大,因此采用水为提取溶液进行加热提取,成本低、实验条件简单。采用正交试验的方法考察各因素对总黄酮、浸膏得率的影响,获得最佳提取工艺。
1.1
仪器与试药(1)实验仪器
电子分析天平XS105 | METTLER TOLEDO |
电子调温电热套98-1-B型 | 天津市泰斯特仪器有限公司 |
电热恒温水浴锅HWS24 | 上海一恒科学仪器有限公司 |
常压恒温干燥箱XMTD-822 | 上海精宏实验设备有限公司 |
紫外分光光度计UV9100 | 北京瑞利分析仪器公司 |
移液枪(200 μL、1000 μL) | GILSON |
(2)实验试药
葛花
产地:安徽
北京三和药业有限公司
藤茶(产地:广西)、青果(产地:广东)、甘草(产地:甘肃)
芦丁对照品 | 批号:100080-20708
中国食品药品检定研究院 |
甲醇 (AR) | 国药集团化学试剂有限公司 |
亚硝酸钠(AR) | 上海联试化工试剂有限公司 |
硝酸铝(AR) | 上海展云化工有限公司 |
氢氧化钠(AR) | 上海联试化工试剂有限公司 |
1.2 泡腾片提取工艺条件的研究1.2.1
正交试验筛选称取藤茶、葛花、青果、甘草各
0.5倍处方量为
1份,共
9份,以加水量(
A),提取时间(
B),提取次数(
C)为考察因素,按表
1的因素水平进行
L9(34)正交试验,根据总黄酮含量、浸膏得率进行评价,考察最佳提取工艺条件。
1.2.1.1
水提取液浸膏得率的测定吸取1.2.1项下提取的每份药液
15 ml,转移到干燥蒸发皿内,置于水浴锅内蒸发水份至流浸膏后,放入烘箱于
100℃烘干到恒重,称重,记录结果并计算,结果见表
21.2.1.2
水提取液总黄酮的含量测定对照品溶液的制备:称芦丁对照品适量,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释至每1 ml含
0.2 mg的芦丁溶液,制得对照品溶液。
供试品溶液的制备:取上述
9份提取物各
1 ml,于
50 ml容量瓶中,并用水稀释至刻度。
芦丁对照品标准曲线制备:精密吸取芦丁对照品溶液
0.0,
1.0,
2.0,
3.0,
4.0,
5.0,
6.0 ml,分别置
25 ml(
V3)量瓶中,加水至
6 ml,加入1 ml的
5% NaNO2,混匀,放置
6min,往容量瓶里加入1 ml的
10%Al
(NO3)3,混匀后静置
6min,加入
10 ml NaOH试液,混匀,加蒸馏水至刻度,混匀,静置
15分钟,以
0.0 ml对照品溶液制备的溶剂为空白对照,在
510nm波长下测定各组的吸光度值。以吸光度为纵坐标
(A),浓度为横坐标(
mg/ml),绘制标准曲线,结果见图
1。
样品测定:吸取待测溶液
10 ml(
V2)于
25 ml容量瓶中,照芦丁对照品标准曲线制备自“加入
1 ml的
5% NaNO2”起,在波长
510nm下测定样品的吸光度,
(
X)。
根据标准曲线求出样品中总黄酮的含量
结果计算: X—试样中总黄酮百分含量,以芦丁(C27H30O16)计, g/100g(ml);C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度,mg/ml;V1—试样定容体积,ml;V2—吸取供试液体积,ml;V3—显色定容体积,ml;M—试样取样量,g(ml)。结果见表2,表3. 表1 提取正交试验因素水平表
水平 | 因素 |
A加水量(倍) | B提取时间(h) | C提取次数 |
1 | 10 | 0.5 | 1 |
2 | 15 | 1.0 | 2 |
3 | 20 | 1.5 | 3 |
注:以
D因素为误差项
图1芦丁标准品标准曲线
采用加权平均法对浸膏得率、总黄酮含量进行综合评估,由于含量对泡腾片疗效的影响较大,因此,分别给予浸膏得率、总黄酮含量
40%、
60%的权重进行分配。浸膏的率越高,患者最终单次的给药量越多,较低较好,以最低得率
19.808%为最高得分,而总黄酮为主要有效成份,宜越高越好,故以
1.969为最高得分。以序号
1为例计算综合评分:
(19.808/19.808)*0.4+(0.796/1.969)*0.6=0.643,同理,可求得其余各综合评分,结果见表
2. 表
2提取正交试验结果(
n=9)
序号 | A | B | C | D | 浸膏得率(%) | 总黄酮含量(g) | 综合评分 |
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 19.808 | 0.796 | 0.643 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 29.159 | 1.109 | 0.610 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 34.835 | 1.499 | 0.684 |
4 | 2 | 1 | 2 | 3 | 33.656 | 1.490 | 0.689 |
5 | 2 | 2 | 3 | 1 | 37.467 | 1.854 | 0.776 |
6 | 2 | 3 | 1 | 2 | 23.851 | 0.978 | 0.630 |
7 | 3 | 1 | 3 | 2 | 40.161 | 1.969 | 0.797 |
8 | 3 | 2 | 1 | 3 | 26.402 | 1.099 | 0.635 |
9 | 3 | 3 | 2 | 1 | 34.196 | 1.544 | 0.702 |
K1 | 1.94 | 2.13 | 1.91 | 2.12 | | | |
K2 | 2.10 | 2.02 | 2.00 | 2.04 | | | |
K3 | 2.13 | 2.02 | 2.26 | 2.01 | | | |
R | 0.07 | 0.04 | 0.12 | 0.04 | | | |
表3提取正交试验方差分析
方差来源 | 离差平方和 | 自由度 | F值 | 均方 | 显著性 |
加水量 | 0.007349 | 2 | 3.2139 | 0.003675 | |
提取时间 | 0.002731 | 2 | 1.1945 | 0.001366 | |
提取次数 | 0.02189 | 2 | 9.5733 | 0.01095 | ** |
误差 | 0.002287 | 2 | 1.0000 | 0.001143 | |
由表
3可知,根据水提取液中总黄酮含量与浸膏得率进行评估,各因素对结果的影响大小:提取次数
>加水量
>提取时间,即主要影响因素是提取次数,其次是加水量,提取时间影响最小。以实验结果为参考,结合实际生产情况,最终确定提取工艺为:加水
20倍量,每次提取
0.5h,提取
3次。
1.2.2
提取正交验证实验根据以上所选最佳提取工艺条件,加水
20倍量,每次提取
0.5h,提取
3次,平行
3份,对水提取液的浸膏得率与总黄酮含量进行测定,按
1.2.1.2项下的方法计算综合评分后,求平均得分,结果见表
4.表4提取正交实验验证结果(n=3)
编号 | 浸膏得率(%) | 总黄酮含量(g) | 综合评分 | 平均得分 |
1 | 37.3 | 2.036 | 0.833 | 0.830 |
2 | 38.1 | 2.038 | 0.829 |
3 | 37.4 | 2.021 | 0.828 |
由表
4可知,
3份平行实验最终的平均得分为
0.830,接近于正交设计中的
A3B1C3综合评分,且评分最高,有良好的重复性和较高的准确率,所筛选的提取工艺条件基本稳定,可作为藤青泡腾片的提取方法。
小结与讨论
在提取工艺的探讨过程中,用正交试验的方法研究加水量、提取时间、提取次数对药液浸膏得率和总黄酮含量的影响,获得最适提取条件为:
20倍量水,提取
3次,每次提取
0.5h。试验中发现,青果为橄榄的干燥果实,本处方中用量较少,为方便称取,同时提高没食子酸等有效成份的提取率,宜先将其进行粉碎;藤茶、葛花密度小,提取过程中浮于水面,应将其充分润湿,使其浸没于水中,以免影响各成份的提取率;若直接加热煎煮,提取过程中水分蒸发严重,实验结果重现性差,宜采用冷凝回流的方法进行提取。