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手性化合物分离案例分享
该化合物,需分离对映异构体。方法开发尝试一:
色谱条件 |
色谱柱 | Daicel Chiralpak AY-H 250*4.6mm 5um |
流动相 | n-Hexane:Ethanol=90:10 |
流速 | 1.0mL/min |
波长 | 220nm |
结果:样品浓度10mg/mL,进样量5μL时,主峰峰高很低,且有多个峰。附图如下
分析原因:样品本身存在酮式烯醇式互变,导致多峰;正相系统背景高,而该化合物在低波段下响应较高,收到背景干扰严重。方法开发尝试二
尝试了反相
液相的手性方法去实现分离。存在和正相相同的问题,由于酮式烯醇式互变导致峰裂分。
方法开发尝试三
尝试
气相手性柱去实现分离
用了仅有的两根
气相手性柱,达不到完全分离。手性化合物性质接近,通过调节升温程序,也无济于事
方法开发尝试四:1、衍生条件摸索寻找衍生条件。
将化合物衍生成稳定的,紫外吸收大的物质,再去实现异构分离。
醛酮类化合物易于和肼类化合物反应,设计2,4-二硝基苯肼与之反应,生成带苯环,稳定的化合物。
先通过普通反相C18色谱柱寻找衍生条件,保证衍生完全。
最终选用乙腈作为稀释剂,衍生剂浓度:样品浓度=7:1,
选取超声时间20min,能保证其完全衍生。
用
LCMS对最终衍生物的结构进行了确认。
用反相也确定了其最大吸收波长为356nm。
2.色谱条件优化
由于采用了乙腈作为稀释剂,首先尝试能耐水相的正相色谱柱来进行分离。
OJ-RH 150mm 4.6mm 5um,在甲醇-三氟乙酸水体系,乙腈-三氟乙酸水体系下,能分开,最好分离度1.2,不能完全分离。根据实验室条件,换下面色谱柱
OD-RH 250mm 4.6mm 5um,在甲醇-三氟乙酸水体系下,完全分离
至此,方法开发完成。总结:一些性质比较活泼的化合物,走投无路之时,可以通过衍生使其成为有吸收,有保留,稳定的化合物,再去开发方法,达到实验目的
。
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