GPC的应用之植物油中9种抗氧化剂的测定分享
Q:实验室配置了GPC,有什么用呢?
A:样品的性质不同,对应的分离原理不同,如果前处理过程中增加GPC,等于增加了分离或净化的过程。
在对各类食品、农产品、水产品和中药材中的农残、半挥发性有机物分析时,样品中一般会含有大分子物质(如色素、油脂等),如果不去除这些物质,会影响最终的分析结果及色谱柱的使用寿命。
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针对此问题,在农残、半挥发性有机物的样品分析前,必须进行有效的净化前处理。如果实验室中有GPC那就事半功倍了。接下来我们不妨了解一下GPC在液相中的应用。
GPC的分离原理
一种含有不同分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下运动和无定向的扩散运动。
大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。
小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出。
样品洗脱图
GPC的作用:
? 净化样品,去除样品中的大分子基质或者小分子干扰物质,净化后适合采用GC, HPLC,GCMS等仪器的分析,例如食用油中抗氧化剂、多环芳烃等的测试,须通过凝胶净化前处理方式去除油脂的等干扰物,将待分析物和干扰物分离开。
? 保护分析仪器及色谱柱,防止大分子物质堵塞后续分析用色谱柱及仪器。
GPC的应用案例:
1. 适用范围
食品中PG、THBP、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、DG和BHT等九种抗氧化剂的测定。
参考标准
《GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定》。
2.原理
油脂样品经有机溶剂溶解后,使用凝胶渗透色谱(GPC)净化。
3.标准溶液的配置
分别称取没食子酸丙酯(PG),叔丁基对苯二酚(TBHQ),去甲二氢愈木创酸(NDGA),叔丁基对羧基茴香醚(BHA),2, 6-二叔丁基-4-羧甲基苯酚(lonox-100),没食子酸辛酯(OG),2, 6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT),没食子酸十二酯(DG)10mg,用乙腈溶解并定容到10mL,得1000μg/mL的单标。
称取2, 4, 5-三羧基苯丁酮(THBP)1mg,用乙腈溶解并定容到10mL,得单标100μg/mL。
流动相配制:1L环己烷和1L乙酸乙酯等比例混匀。
4.提取步骤
精确称取取1g油样于10ml容量瓶中,以流动相定容至刻度,待净化。
加标过程:精确称取取1g油样于10ml容量瓶中,精确加入0. 2mL 100 μg/mL 9种抗氧化剂混标,以流动相定容至刻度,得加标量为20mg/kg,上机浓度为5μg/mL。
仪器型号 | 月旭科技GPC 1600凝胶色谱仪 |
色谱柱型号 | 月旭Bio-Beads S-X3凝胶色谱柱,规格:400mm*25mm |
流动相 | 乙酸乙酯-环己烷(1:1) |
流速 | 5.0 mL /min |
进样量 | 5.0ml |
收集时间 | 14-25min |
波长 | 254nm |
5.凝胶色谱净化条件
GPC谱图
6. 液相色谱分析条件
色谱柱:月旭Ultimate® XB-C18,5um ,4.6×250mm
流动相:A:0.5%甲酸水溶液;B:甲醇
流速:1mL/min
进样量:5μL
柱温:35℃
检测波长:280nm
梯度洗脱表:
时间(min) | A相:0.5%甲酸水溶液 | B相:甲醇 |
0 | 60 | 40 |
20 | 30 | 70 |
25 | 0 | 100 |
35 | 0 | 100 |
植物油经过GPC净化后谱图
9种抗氧化剂混标5μg/mL谱图
植物油加标20mg/kg过GPC后谱图
结果展示
GPC-1600凝胶色谱仪加标回收率汇总表
物质名称 | 样+标 | 回收率% |
PG | 20mg/kg | 80% |
THBP | 20mg/kg | 101% |
TBHQ | 20mg/kg | 81% |
NDGA | 20mg/kg | 83% |
BHA | 20mg/kg | 90% |
Ionox-100 | 20mg/kg | 95% |
OG | 20mg/kg | 83% |
DG | 20mg/kg | 80% |
BHT | 20mg/kg | 83% |
货号 | 名称 |
PUP0050 | 高压恒流输液泵50ml SST 30Mpa(正相) |
1000.1200 | 紫外可见光检测器(0-100ml) |
1000.3100 | 进样阀(带5ml定量环,安装架) |
1601000000008 | HT1500L制备型自动进样器 |
1000.3105 | 5ml定量环 |
1000.0000 | 溶剂托盘 |
1302050000008 | 120位馏分收集器(100-200)mL |