首先采用热重分析法对Sil-P-C12固定相进行表征。如图1a所示，100 ℃以内，每步产物均有少量热损失，推测是硅球内部存在少量的结合水。Sil-APTS和Sil-P-C12分别在400 ℃和300 ℃时质量损失加剧，这是由于材料表面键合了有机官能团所致。与Sil-APTS相比，Sil-P-C12产生了更高的热重量损失，表明Sil-P-C12材料的成功制备。

采用傅立叶变换红外光谱法对Sil-P-C12固定相进行进一步表征。如图b所示，由于固定相材料是以硅胶为基底，硅球、Sil-APTS和Sil-P-C12的红外光谱图中均在1100 cm^-1处出现Si-O键的伸缩振动峰。硅球红外谱图中980 cm^-1处为硅球表面Si-OH的伸缩振动特征峰，在硅球表面键合ATPS后，980 cm^-1处该峰消失，并在680 cm^-1处出现亚甲基C-C键的特征峰，1620 cm^-1处为伯胺类N-H键弯曲振动峰，因此认为APTS已成功键合在硅球表面。在Sil-P-C12的红外光谱图中，出现2930 cm^-1和2840 cm^-1处疏水碳链C-H键特征峰，由此可以表明固定相材料的成功制备。

图1 硅球、Sil-APTS和Sil-P-C12的热重分析图（a）和红外光谱图（b）

Thermogravimetric curves (a) and FT-IR spectra (b) of the SiO₂, Sil-APTS and Sil-P-C12

Sil-P-C12色谱柱的保留机制

Sil-P-C12固定相材料表面含有多种基团，首先是羟基、氨基和磷酸酯结构，这些基团使得固定相具有强亲水性。由于固定相材料同时引入了疏水的十二烷基链，因此，固定相整体具有两亲性。采用疏水性不同的苯、乙苯、丙苯和丁苯考察了Sil-P-C12色谱柱的保留机制，如图2a，当流动相中乙腈含量从30%增加到80%时，四种物种的保留因子均呈现下降趋势，以丙苯为例，其保留因子从1.98下降到0.01，表现为典型的反相保留机制。采用亲水性核苷/核酸碱基类物质—尿嘧啶、尿苷、腺苷和肌苷对Sil-P-C12色谱柱的保留机制进行考察，如图2b所示，随着流动相中H₂O含量从10%增加到50%，四种物质的保留因子均呈现下降趋势，以腺苷为例，其保留因子从2.15下降到0.01，表现为典型的亲水保留机制。

图2 流动相中乙腈体积分数对疏水性烷基苯类化合物（a）和亲水性核苷/核酸碱基类物质（b）色谱保留的影响

色谱条件：流动相，乙腈-水；流速，1.0 mL/min；检测波长，(a) 214 nm；(b) 254 nm

Fig.2 Effect of ACN content in mobile phase on chromatographic retention for hydrophobic alkylbenzene compounds (a) and hydrophilic nucleosides and nucleic acid bases compounds (b)

Chromatographic conditions: mobile phase, ACN-H₂O; flow-rate, 1.0 mL/min; detection wavelength, (a) 214 nm; (b) 254 nm

附件：

9Sil-P-C12色谱固定相表征及保留机制.docx