主题：【分享】【“仪”起享奥运】实验室培养细胞老是染菌，是真菌感染，怎么能彻底消灭孢子

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。

细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。营养物和水一起，又叫细胞培养液，培养液中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。但同时这些物质也是微生物生长繁殖所需要的营养，难免会出现细胞污染的问题。

细胞培养污染有哪些种类

一、细菌的污染

特征：大小在0.5~5 μm，比动物细胞小很多。多呈球状或杆状，形态规则，分布均匀；增殖速度快，一般污染后48~72小时爆发式增殖；营养消耗快，培养基很快变黄，变浑浊；镜下观察有明显的定向运动。

二、真菌污染

特征：呈链球状或丝状。常形成肉眼可见的菌落，培养基颜色无变化或变紫，仅对局部细胞影响较大，其他地方生长正常。会形成孢子，容易污染其他细胞。

三、支原体污染

特征：最小的微生物，无法通过光学显微镜看见，但可通过电镜观察到。感染支原体的细胞，在某一时间点碎片突然增多，随着传代，细胞状态显著变差。支原体污染可通过气溶胶传播，影响同一细胞房其他细胞。

四、黑胶虫污染

特征：无明确定义，镜下无法直接观察到。主要表现为细胞状态差，黑点和碎片多，布朗运动。通过检测发现主要为支原体污染，部分为未知的增殖不明显的微生物污染。

五、霉菌污染

特征：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37℃孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差。

六、病毒污染

特征：细胞胞状态变差，出现空泡化的现象。

细胞一旦发现有污染出现，应及时对所用试剂和耗材进行清理。耗材可更换新的或者重新高压灭菌，试剂可重新过滤除菌或者更换新批次，操作台和细胞房需用消毒液进行全面清洁消杀后方可复苏新的细胞，以免反复出现污染。

细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。培养基营养丰富，也是微生物的营养物质，细胞培养微生物污染是常发生的事情，也是非常严重的事情。

一个细胞经过大量培养成为简单的细胞或极少分化的多细胞的一个过程，整个过程对培养环境的要求极其严苛，为避免被微生物污染，细胞培养箱的清洁与消毒是必不可少的。然而，针对培养过程中面临的各种污染源，各细胞培养箱微生物的控制方式和效果不尽相同，对于细胞来说，非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存，培养箱本身是不会辨别的，而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内，因为箱体内能否抑菌或灭菌非常关键！

细胞培养霉菌污染的原因：

1、取放细胞时引起的污染

细胞培养过程中，取放细胞是最基本的操作，培养房开关门的瞬间，环境中的微生物或多或少会进入培养箱中，而且内外温差导致内门冷凝水的产生，极易吸附微生物，都是造成培养箱污染的风险因素。

2、灭菌不彻底造成的二次污染

细胞培养过程中，因其它操作问题（如培养基泼洒，水盘污染等），造成培养房的大规模污染也时常会发生，此时就需要对培养箱进行灭菌消毒，常规的消毒（如紫外照射）只能达到表面消毒的效果，特别是对真菌等顽固性污染，无法进行彻底灭菌，导致后续培养过程中细胞污染频发。

培养箱是可以对细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温设备。那么当培养箱出现霉菌污染我们应该怎样进行处理呢？首先我们可以看看培养箱自身带不带有灭菌功能，如果没有我们可以先用纯水擦洗，再用诺福杀孢子剂擦拭，晾干即可完成杀菌作用。诺福杀孢子剂可彻底解决细胞培养箱霉菌的污染问题。