主题：【第十七届原创】豇豆中农残能力验证经验分享

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zyl3367898

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农检联合队发表于：2024/08/16 17:58:38 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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豇豆中农残能力验证经验分享

鹤壁市产品质量检验检测中心张艳丽

农残能力验证是农产品检测机构检测水平的测试，基本是省级农业部门进行考核，能力验证年年有，每年都会有一些问题出现，总结了一些经验，分享给大家。

一、准备工作

能力验证样品为豇豆，考核参数见下图:

接到能力验证文件以后，我们进行了一系列的准备工作。

1.样品基质准备

购买了豇豆样品，进行了浸泡，然后清洗匀浆，按照《GB 23200.121-2021》方法做前处理，收集样品基质。基质上机检测，找最干净的那一种来当基质。

图1：收集豇豆基质

2. 前处理准备

按照《NY/T 761-2008》、《GB 23200.113-2018》、《GB 23200.121-2021》等前处理方法，准备了玻璃器皿、试剂、破碎机、匀浆机、氮吹仪、烘干器等。

图2：前处理准备

3. 仪器的准备

此次需要操作两台气相色谱仪，一台气质联用仪和一台液质联用仪，对仪器进行了进样垫、衬管、色谱柱等的检查，基本上都换成新的。

4. 标液的准备

根据仪器上认证的参数，各仪器根据参数配成混标，在四台仪器上分别做标液模板，对于响应度不好的进行调整。

二、检测过程

能力验证样品为豇豆，采用塑料离心管封装。考核样品质量为25.00g，须一次性全部转移提取。

1.NY/T761-2008

样品量只有25.0g，如果做不同的前处理，样品量是不够的。所以提取方法是一样，净化方法分开，一个用《NY/T 761-2008》方法，上气相色谱仪检测，一个用《GB 23200.121-2021》方法，上气质联用仪与液质联用仪检测。

1.1提取

将25.0g菜样，加50.00mL乙腈，要分次清洗塑料离心管，转移至广口瓶中，在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g∽7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液40mL∽50mL，盖上塞子，剧烈1震荡min，在室温下静置30min，使乙腈相与水相分层。

图3：提取过程

1.2净化

从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，放人150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，加人2.0mL丙酮，盖上铝箔，备用。

将上述备用液完全转移至15mL刻度离心管中，再用约3mL丙酮分三次冲洗烧杯，并转移至离心管，最后定容至5.0mL，在旋涡混合器上混匀，分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中，供色谱测定。

图4：有机磷净化过程

从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液，放人150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加热，杯内缓缓通人氮气或空气流，蒸发近干，加入2.0mL正己烷，盖上铝箔，待净化。

将弗罗里矽柱依次用5.0mL丙酮十正己烷（10+90）、5.0mL正已烷预淋洗，条件化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL丙酮+正己烷（10十90）冲洗烧杯后淋洗弗罗里矽柱，并重复一次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮吹蒸发至小于5mL，用正己烷定容至5.0mL，在旋涡混合器上混匀，分别移人2mL自动进样器样品瓶中，待测。

图5：有机氯净化过程

2.GB23200.121方法

从100mL具塞量筒中吸取8.0mL上清液，至PSA 400mg，C18 400mg，MgSO4 1.2g的净化管中，涡旋混匀1min，4200r/min离心5min，吸取上清液过0.22μm滤膜，分别上气相色谱仪、气质联用仪、液质联用仪等测定。

图6：GB23200.121方法净化过程

三、质控样品

上机后，考核样品得出结果，做质控样品前处理，前处理过程进行了质量控制，质控样品是市场上购买的豇豆样品，进行破碎，分别进行NY761-2008、GB23200.121方法进行前处理，上机测定，确定是无农药残留的样品，根据上述结果进行加标试验。

1. 配制标液

加标试验时发现加标回收率不正常，检查得知，所配标液为0.03ug/mL或0.05ug/mL，而单标标液浓度为10ug/mL，直接配制成0.03ug/mL，误差较大。将单标标液浓度由10ug/mL配制成1.0ug/mL，再配制成0.03ug/mL或0.05ug/mL。

2. 加标问题

用所配的标液来计算质控样品，依然有回收率低可高的问题，再次查找原因，加标时，从10ug/mL的单标里加到豇豆里，添加量为0.03mg/kg或0.05mg/kg时，加入的标液量很小，比如在25.0g菜中添加0.03mg/kg的毒死蜱时，从10ug/mL标液中吸75uL，吸的量太少可能引起误差，而混标从1.0ug/mL的标液来配制，这样也会造成误差。所以加标时也选择从1.0ug/mL的标液来添加。样品结果见表1，质控样品结果见表2。

四、纠结

其它地市同行传来补考的消息，这使我们很震惊，询问他们补考的原因，有两个，一个是异菌脲未检出，二是水胺硫磷回收率高为130%以上。

随即对考核样品的异菌脲进行了气相色谱仪、液质联用仪的检测，液质联用仪用离子对进行筛查，气相色谱仪使用在考核样品中添加异菌脲来判断，异菌脲如果在考核样品出现峰，说明原样品没有，如果在原来的峰上增加了峰高，说明原样品中有异菌脲。最后判断无异菌脲添加，不用报。

图7：判断考核样品中是否有异菌脲

五、污染

做能力验证时，我们发现干净的豇豆基质中居然发现有毒死蜱，可能是污染了，这样能力验证样品的结果就可能有问题，立即查找污染原因。
1. 玻璃器皿、备件污染

怀疑是玻璃器皿污染，从仓库里领新的具塞量筒、烧杯、广口瓶等，清洗后使用。清洗过程发现有交叉污染的现象，比如所有的玻璃器皿用完后，浸泡在一个大盆中，这样配过标液的容量瓶、加标的样品、空白样品等都在一起，因为瓶子太多，如果清洗不干净，反而引起交叉污染。所以清洗时选择不同的盆清洗不同的玻璃器皿，比如配标液的容量瓶单独浸泡，质控样品与考核样品所用的玻璃器皿一起浸泡，空白基质的玻璃器皿单独浸泡。

烘干玻璃器皿的烘干头要进行清洗，氮吹仪上的氮吹针要进行清洗，匀浆头要拆卸下来，进行深度清洗。

图9：清洗仪器备件

2. 试剂污染

对所用的乙腈、甲醇、丙酮、正己烷等试剂都上机进行检测，对移液管刻度管也进行了吸液检测，看是否有毒死蜱的检出。

3. 标液污染

配制毒死蜱的单标，发现与5种混标的峰面积相差3倍，这样的话就有一个重要的问题，如果用单标毒死蜱来计算考核样品，数据是0.0315mg/kg，而用混标来计算，数据是0.0105mg/kg，用哪种标液为准？是哪种标液造成毒死蜱的污染？

将5种混标两两相配，并将5种混标逐一添加，进液质联用仪检测峰面积，发现氟虫腈加入后，毒死蜱的峰面积会大幅度增加，判断氟虫腈里有毒死蜱，氟虫腈污染。重新配制氟虫腈，再配制5种混标，峰面积正常。计算考核样品后，上报数据。排查污染的表格见表3。

4. 上报数据

找到原因后，重新配制标液，进单标确定标液无污染后，开始进行考核样品的检测，同时做质控样品。一个考核样品里添加农药也不少，结果数据见表4，质控样品数据见表5。数据上报后，顺利通过能力验证。

六、总结

能力验证过程很辛苦，得出准确的数据依赖于各环节的掌控，比如玻璃器皿、前处理过程、仪器维护、数据研判等等。但这些问题仅仅是技术问题，还有重要的一环，是实验室管理，通过能力验证暴露出一些管理方面的欠缺。

1、人员分工

此次能力验证，参与人员6人，未进行清晰分工，配标液的人员有好几个，标液污染后，无法追溯。像这样的人员参与较多的工作，应该有一个明确的任务分工表，每人负责其中一项，旁边还要有监督人员，每一个过程便于追溯，不至于人多手杂，出错后无从查起。

2、交叉污染

清洗玻璃器皿时，一定要防止交叉污染，要分类进行清洗，自来水、纯水、乙醇等步骤不可少。烘干玻璃器皿的烘干头要进行清洗，氮吹仪上的氮吹针要进行清洗，匀浆头要拆卸下来，进行深度清洗。

3、标液问题

标液配制问题，要进行10倍稀释，100倍以上稀释时，会引起大的误差，而加标时也要与配标液的标液浓度一致，这样质控样品的回收率才会在正常范围之内。

为防止标液污染，在配混标的同时，要进行单标的配制，同时上机检测，峰面积相差太大时，应该是标液受到污染。

4、能力验证思路

拿到考核样品，一般会计算出浓度，再进行质控样品的前处理，质控样品会用与考核样品的含量相近的加标量来检测，但是当标液污染时，质控样品也会失去准确性，相信质控样品的含量，最后导致考核样品数据错误，能力验证不通过。这点一定要注意，整个配制标液或加标时，标液要保证是新打开的，稀释倍数不要超过10倍，标液注意不要污染。