主题：【第八届原创】人免疫球蛋白F c段 生物学活性测定法

一、原理：本法系依据特异性抗体（免疫球蛋白）F a b段与红细胞上已包被的相应抗原结合，抗体暴露出F c段补体Clq的结合位点，从而激活后续的补体各成分，最终导致红细胞的细胞膜受到攻击、破裂，释放出血红蛋白。通过溶血反应动力学曲线，计算人免疫球蛋白激活补体活性的功能指数（4 ) ，以此测定供试品F c段生物学活性。
二、试剂
（1) P B S (pH7.2) 称取无水磷酸氢二钠1.02g,无水磷酸二氢钠0.34g、氣化钠8.77g，加适量水溶解，用lmol/L氢氧化钠溶液或盐酸溶液调p H 值至7.2，再加水稀释至1000ml。
( 2 )钙-镁贮备液 称取氯化钙1.10g、氯化镁5. 0 8 g ,加水25ml使溶解。
( 3 )巴比妥-钙镁贮备液称取氯化钠51.85g、巴比妥钠6.37g，加水1000ml使溶解，加人钙-镁贮备液3.125ml，用lmol/L盐酸溶液调p H 值至7. 3，再加水稀
释至1250ml。除菌过滤后4°C保存备用。
( 4 )牛白蛋白-巴比妥缓冲液称取牛血清白蛋白0. 15g加入巴比妥-钙镁贮备液20 m l中，加水溶解并稀释至100ml。临用前配制。
(5) 1. 3mg/L 鞣酸 P B S (pH7. 2) 溶液A 液称取鞣酸l m g ,加PBS (pH7.2) 10ml，使溶解。
B 液量取 A 液 0.1ml，加 F*BS (pH7. 2) 7.5ml，混匀，即得，临用前配制。
(6) 10%氯化铬溶液称取氯化铬5g，加生理氯化钠溶液50ml使溶解。4°C保存（可保存半年）。
(7) 1 % 氯化铬溶液取1 0 %氯化铬溶液0. lml，加生理氯化钠溶液0.9ml，混匀。临用前配制。
（8）敏化红细胞的制备
A 液取健康人抗凝的O 型血3 人份以上混合，用P B S 洗涤3 次，最后一次以每分钟2 0 0 0转离心1 0分钟分离红细胞。取适量压积红细胞悬浮于1 . 3 m g / L鞣酸P B S
(1 : 4 0 ) , 置3 7 ° C水浴中轻摇3 0分钟后再用P B S 洗涤3次，最后用P B S 制备成2. 5 % 红细胞悬浮液。
B 液用P B S适当稀释的白喉类毒素或腮腺炎病毒与1 % 氯化铬溶液0.25ml混合（1 0 : 1 ) 后，置37°C水浴中轻摇1 5分钟。
将A 液、B 液按1 : 4 混合，置37°C水浴中轻摇3 0分钟。离心，去上清液，用P B S将沉淀（敏化红细胞）洗涤3 次，用牛白蛋白-巴比妥缓冲液悬浮红细胞，调节至
适宜浓度，使其在波长5 4 1 n m处的吸光度为1.0土0. 1。