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主题：【讨论】关于这几天做的液相问题

浏览0 回复21 电梯直达
wangjuan55
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发表于：2010/04/28 12:18:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
C18反相色谱柱，甲醇：0.05%磷酸，梯度洗脱，一般走基线20分钟，35：65，怕时间太长了对柱子有损坏，毕竟是酸液。
26日进了一天样，晚上做标曲，日内精密度，设置自动进样，自动冲柱子。
27早上来了一看，报警，四个气泡，最后lostprime。设置好的冲柱也没走。
为了能继续实验，没有清洗滤头，我把CD道的滤头换成AB道，然后dryprime三次抽气，继续走样，有一个气泡，ok之后就好了。

处理样品，进样，发现情况了，峰一塌糊涂。
做了六份样，开始怀疑第一份样有问题，进第二份，同第一份的图。
跟换流动相酸液，同样如前面的。

进样26日的样品，峰的分离度小了很多，峰型也不如前
冲柱子甲醇，水梯度冲，最后100甲醇半个小时，进行了两次。
晚上也一直用小流速冲。（甲醇问题？样品问题？）

28日重复27日的操作，提取，进样，图还是一塌糊涂
换提取液甲醇，峰的分离度小了很多，峰型也不如前。
再次进样26日的样品，分离度上面的相似，但是峰要高很多，峰面积差不多。（26日处理的样品，甲醇用了一大半不够了，换的新甲醇（也就是27日所用甲醇））

悲哀啊。柱子损坏了？还有损坏的原因是什么？我曾经连续几天用0.05%磷酸做实验也没出现问题，难道这次是因为晚上没冲柱子？
提取所用分析甲醇有问题？什么问题？怎么会差别这么大？、
我该怎么和老板交代？哭

个人觉得，晚上lostprime影响比较大，导致柱效降低。还有就是前处理所用甲醇有问题，所以出双峰（换甲醇提取，没有双峰，只是明显柱效低了）。


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hgycook
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2010/4/28 12:37:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你先测下流动相的PH，跟柱子是有一定的关系，最好在连续做样的时候能让柱子休息一段时间，后来的峰柱效明显低了。
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dowpont
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2010/4/28 13:14:40 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同意楼上!!
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wangjuan55
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2010/4/28 13:25:08 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dowpont(dowpont) 发表:
同意楼上!!


那不同牌子的甲醇提取液，其他的都一摸一样。为什么图谱差别那么大，就是倒数第二个和第三个图。
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2010/4/28 13:27:15 Last edit by wangjuan55
pandora98
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2010/4/28 17:32:51 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般的色谱柱都能耐pH2.0以上的磷酸，0.1％（体积比）的磷酸大概pH值在2.0～2.2左右。我们使用的色谱柱整年都接在仪器上，一年350天，每天24小时，一直不停的使用0.1％的磷酸，柱子也没有因为用酸损伤。
柱子跟机器一样，休息没有太大必要，定期保养是需要的。
我们的柱子用完磷酸放上几天甚至一周也没有太大关系的，只有长时间不用才有必要冲洗。
我觉得还是考虑一下你的样品前处理问题
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有水有渝
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2010/4/28 21:09:23 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最好把系统和色谱柱都清洗一下，可能是色谱柱污染了，最好加保护柱，减小对色谱柱的损害。
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weiyh_001
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2010/4/29 8:38:22 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
偶考虑主要有以下几个原因：
1. 0.05%磷酸一般不会影响柱效的（本人实验室常年用），根据色谱图看，出现了双峰，考虑分析物的稳定性（存在异构体否？）不稳定或有异构体就会出现此类情况；
2. 分析过程中有没有动过柱子，若分析柱被碰撞，可能造成柱子塌陷，出现双峰现象；
3. 柱子被污染，可采用反向采用甲醇、乙腈冲洗1小时。
以上仅供参考。
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wangjuan55
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2010/4/29 9:22:43 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 pandora98(pandora98) 发表:
一般的色谱柱都能耐pH2.0以上的磷酸，0.1％（体积比）的磷酸大概pH值在2.0～2.2左右。我们使用的色谱柱整年都接在仪器上，一年350天，每天24小时，一直不停的使用0.1％的磷酸，柱子也没有因为用酸损伤。
柱子跟机器一样，休息没有太大必要，定期保养是需要的。
我们的柱子用完磷酸放上几天甚至一周也没有太大关系的，只有长时间不用才有必要冲洗。
我觉得还是考虑一下你的样品前处理问题


hehe 呵呵，我不知道您的是什么牌子色谱柱。我的是依利特的，去年十月份买的，一直用的是0.05%磷酸。稍大一点都不敢用。不过这次确实 是晚上lostprime没冲柱子，第二天柱效立马降低了。前处理是用甲醇超声提取的，按说第二个甲醇有些问题，但进样量只有10ul，应该没有影响那么大吧？
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wangjuan55
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2010/4/29 9:24:11 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
最好把系统和色谱柱都清洗一下，可能是色谱柱污染了，最好加保护柱，减小对色谱柱的损害。


柱子清洗过了，压力没有高，应该没堵，还有我们一直有保护住。谢谢您的指点。
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wangjuan55
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2010/4/29 9:29:05 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 weiyh_001(weiyh_001) 发表:
偶考虑主要有以下几个原因：
1. 0.05%磷酸一般不会影响柱效的（本人实验室常年用），根据色谱图看，出现了双峰，考虑分析物的稳定性（存在异构体否？）不稳定或有异构体就会出现此类情况；
2. 分析过程中有没有动过柱子，若分析柱被碰撞，可能造成柱子塌陷，出现双峰现象；
3. 柱子被污染，可采用反向采用甲醇、乙腈冲洗1小时。
以上仅供参考。


谢谢您的指点
1 这个出现双峰的原因不是柱子问题，是提取液甲醇问题，我换了另一种甲醇，出的色谱图没有双峰，只是柱效低了，倒数第二张图。分析物是稳定的，我去年做的样品，今年又过滤了一下，进样，峰很好。
2 没有动过柱子
3柱压没有高，强保留物质？昨晚冲了很久，用甲醇。今天没进样，想直接活化得了。
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有水有渝
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2010/4/29 12:59:11 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉依利特的液相色谱柱不是很耐用，色谱柱可以用乙腈冲洗一下。
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