主题：【第六届原创】【第四届原创】高效液相色谱法测定食品中的纳他霉素

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毛毛儿

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发表于：2011/12/29 13:30:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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纳他霉素是一种多烯烃大环内酯类抗真菌剂，它对几乎所有的酵母菌和霉菌都有抗菌活性，不仅能够抑制真菌，还能防止真菌霉素的产生。其分子结构式为：

纳他霉素对人体无害，很难被人体消化道吸收，而且微生物很难对其产生抗性，同时因为其溶解度很低等特点，通常用于食品的表面防腐。纳他霉素是目前国际上唯一的抗真菌微生物防腐剂。目前该产品已经在50多个国家得到广泛使用。主要应用于乳制品、肉制品、发酵酒、饮料果汁，方便食品，烘烤食品，香基等的生产和保藏。本次试验参考国家标准《GB/T 21915-2008 食品中纳他霉素的测定液相色谱法》对食品中纳他霉素进行检测，它虽然是目前规定的合格防腐剂，但要控制添加含量，目前美国对其限量为20ppm。

实验部分

1.1、试剂

甲醇：色谱纯

水：去离子水或相当纯度的水。

纳他霉素标准物质：CAS编号：81-88-9，纯度≥99%。

标准储备液：准确称取纳他霉素 10mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解后再定容至100ml, 0℃-4℃条件下避光保存。

1.2、设备和仪器

高效液相色谱仪器：LC310配紫外可见光检测器（江苏天瑞仪器股份有限公司）。

分析天平：十万分之一，能精确到0.01mg，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；

超声波清洗器：张家港市神科超声电子有限公司；

超纯水机：南京易普易达科学发展有限公司；

离心机：湖南凯达科学仪器有限公司。

1.3 溶液配备

标准储备液：准确称取纳他霉素 10mg（精确至0.01mg），用甲醇溶解后定容至100ml, 0℃-4℃条件下避光保存。

1.4 色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18，250*4.6mm，5μm，月旭材料科技（上海）有限公司，或性能相当者；

流量：1.0ml/min；

柱温： 35℃；

进样量：10ul；

检测波长： 305nm；

流动相：甲醇+水=65+35

图1.纳他霉素的谱图

1.5 样品前处理方法

准确称取10.00g样品，加入40ml甲醇/水=65/35超声提取30min，置于离心机中以3500r/min离心5min，上清液过0.45μm针头式过滤器，收集滤液上机测试。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

流动相的选择：参考相关资料，选择用甲醇水和乙酸作为流动相，但是峰拖尾严重，所以选用甲醇和水做流动相，以甲醇水不同比例做实验，选定甲醇：水=65:35的时候峰型最好，由于等度模式洗脱以不同流速做比较，在1.0ml/min时候效果最佳。

波长选择：采用PDAD检测器，对纳他霉素再200nm至700nm区间内进行光谱扫描，所得到的谱图如图2所示。由图2可以看出，纳他霉素最佳吸收波长在305nm。